Use of a GnRH synthetic analog (buserelin) for estrous induction in female dogs / Utilização de análogo sintético de GnRH (buserelina) na indução do estro em cadelas

The aim of this study was to evaluate the effectiveness of a GnRH synthetic analog, as an estrous inducer in female dogs when administered during the anestrous phase, and to evaluate the pregnancy rate achieved through natural copulation. For this purpose, ten female dogs of different breeds were used. The subjects received buserelin by intramuscular injections at a dose of 2,1mcg when female dogs weighed up to 10kg (Group 1) and of 4,2mcg when the dogs weighed above 10kg (Group 2). Of the ten subjects, only three presented estrus after a single injection of buserelin: two dogs from Group 1 and one dog from Group 2 on average 7±1.29 days. The remaining seven dogs were given a second dose of buserelin, equal to the first administration. Of these, three belonged to Group 1 and four to Group 2. Four of these dogs exhibited clinical signs of estrus within, on average 9±7.3 days from the second injection. The seven female dogs that did enter estrus were fertilized successfully through natural copulation. The administration of buserelin was effective in inducing estrus in female dogs during the anestrous phase, with a maximum of two administrations.(AU)

Objetivou-se avaliar a eficácia de um análogo sintético ao GnRH como indutor de estro em cadelas em anestro e a taxa de prenhez por meio de cópula natural. Para isso, foram utilizadas 10 fêmeas caninas de diferentes raças. Cadelas de até 10kg de peso (grupo 1) foram submetidas à administração de buserelina por via intramuscular, na dose de 2,1mcg, e cadelas acima de 10kg (grupo 2) foram submetidas à mesma medicação, porém na dose de 4,2mcg. Das fêmeas em anestro, apenas três apresentaram estro com apenas uma aplicação, sendo duas do grupo 1 e uma do grupo 2, em 7±1,29 dias, em média. Em sete cadelas foi administrada mais uma dose de buserelina; destas, quatro eram pertencentes ao grupo 2 e três eram do grupo 1. Os sinais de estro ocorreram, em média, após 9±2,73 dias da segunda aplicação. As sete cadelas que manifestaram estro foram fertilizadas por meio de cópula natural. A administração de buserelina é eficiente para a indução de estro, em cadelas em anestro, em, no máximo, duas aplicações.(AU)

Effect of transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes collected in different stages of the estrous cycle / Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

This study evaluated the influence of estrous cycle stage and transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes. The bitches were categorized into two groups based on stage of estrus cycle: diestrus or anestrus. One ovary of each pair collected was transported in saline solution at 4°C while the other was transported at 37°C. Thus, ovarian tissue was sliced in PBS to release cumulus oocyte complexes (COCs). A total of 345 COCs (n = 186 oocytes from ovaries of bitches in anestrus and 159 in diestrus) were cultivated in TCM 199 supplemented with HEPES, sodium pyruvate, cysteine, follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG), estrogen (E2) and epidermal growth factor (EGF). After 72h of maturation, the COCs were denuded, fixed and stained to assess nuclear maturation. The Fisher test was applied to examine the differences between the groups. The significance level adopted was 0.05. The oocytes obtained from the ovaries from bitches in diestrus transported at 4°C shown increased frequency of oocytes in metaphase II stage than those maintained at 37°C (p 0.01). Similarly, there was increased frequency of oocytes in metaphase II (11.1%) stage from the ovaries of bitches in anestrus and transported at 4°C, than those maintained at 37°C (p 0.05). It was concluded that transport temperature influences the results of canine oocyte viability and in vitro maturation, regardless of reproductive stage of the female.

Foi avaliada a influencia do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estagio do ciclo estral anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% a 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oocito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oocitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteina, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E2) e fator de crescimento epidermal (EGF). Apos 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estagio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estagio reprodutivo da fêmea.

In vitro development of canine somatic cell nuclear transfer embryos in different culture media

The objective of the present study was to investigate the effects of three different culture media on the development of canine somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. Canine cloned embryos were cultured in modified synthetic oviductal fluid (mSOF), porcine zygote medium-3 (PZM-3), or G1/G2 sequential media. Our results showed that the G1/G2 media yielded significantly higher morula and blastocyst development in canine SCNT embryos (26.1% and 7.8%, respectively) compared to PZM-3 (8.5% and 0%) or mSOF (2.3% and 0%) media. In conclusion, this study suggests that blastocysts can be produced more efficiently using G1/G2 media to culture canine SCNT embryos.

Profile of IL-2, IL-4, IL-10, IFN-gamma, TNF-alpha and KC-like cytokines in pregnant bitches / Perfil de citocinas IL-2, IL-4, IL-10, IFN-gamma, TNF-alpha e células KC-like em cadelas gestantes

The aim of this study was to determine the profile of IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ, and TNF-α cytokines and KC-like cells (natural killer) in pregnant bitches, unpublished values for the species. A total of 27 females of the Shi Tzu, Pug, English Bulldog and French breeds, weighing 4-20kg and aged 4-6 years were used. Blood samples were collected from bitches during the anestrous and on the 2nd, 5th, 6th, 7th and 8th week of pregnancy. Serum levels of cytokines were measured by panel MILLIPLEX MAP (CCYTO-90K, MILLIPORE, Billerica, Massachusetts, USA) validated for dogs. Twenty four females showed physiological pregnancy and three bitches showed pathological pregnancy. There was no difference between cytokine values during anestrous and gestational weeks of bitches (P>0.05). However, it was possible to verify the physiological behavior of serum levels during modulation of immune response in the gestational process of animals. In animals with gestational disorders, abnormal values for IL-2, IL-4 and INF-y were noted. It was concluded that serum levels of cytokines evaluated in pregnant bitches can help the better understanding of physiological and pathological gestational processes and correlated immunology in this species...

Objetivou-se por meio deste estudo determinar o perfil das citocinas IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ, TNF-α e células KC-like (natural killer) em cadelas gestantes, valores que são inéditos para a espécie. Foram utilizadas 27 fêmeas das raças Shi-tzu, Pug, Bulldog Inglês e Francês, pesando de 4 a 20 kg e com idade entre quatro e seis anos. Foram coletadas amostras sanguíneas das cadelas durante o anestro e na segunda, quinta, sexta, sétima e oitava semanas gestacionais. Os níveis séricos de citocinas foram dosados pelo painel MILLIPLEX MAP (CCYTO-90K, MILLIPORE, Billerica, Massachusetts, EUA) validado para cães. Vinte e quatro fêmeas apresentaram gestação fisiológica e três cadelas, gestação patológica. Não foi verificada diferença entre os valores das citocinas durante anestro e nas semanas gestacionais das cadelas (P>0,05). Entretanto, foi possível verificar o comportamento fisiológico dos níveis séricos durante a modulação da resposta imune no processo gestacional dos animais. Verificaram-se, nos animais com afecções gestacionais, valores alterados para IL-2, IL-4 e INF-y. Pôde-se concluir que os valores séricos das citocinas avaliadas, nas cadelas gestantes, podem auxiliar no maior conhecimento dos processos fisiológicos e patológicos da gestação, correlacionados à imunologia, nessa espécie...

Cryoprotection effectiveness of low concentrations of natural and lyophilized LDL (low density lipoproteins) on canine spermatozoa / Eficiência de baixas concentrações de lipoproteínas de baixa densidade natural e liofilizada na crioproteto de espermatozoides caninos

The aim of this study was to evaluate the use of low concentrations of natural and lyophilized low density lipoprotein (LDL) from hen's egg yolk for cryopreservation of canine semen. Different ammonium sulphate concentrations were tested to extract LDL from egg yolk. The yolk was centrifuged, and LDL was isolated using 10, 20, 40, 45, or 50 percent ammonium sulphate solution (ASS). The LDL-rich floating fraction was collected for chemical characterization. Dry matter content was lowest (P<0.05) in the LDL extracted with the 50 percent ASS. The purification of LDL increased in association with increasing ammonium sulphate concentrations. SDS-PAGE showed that the 50 percent ASS solution yielded a purer fraction of LDL from egg yolk. For semen cryopreservation, TRIS extender was used replacing 20 percent egg yolk (control) by natural or lyophilized LDL using 1, 2, and 3 percent (w/v). Semen was centrifuged (755Xg for 7 min), diluted with one of the extenders, packed into 0.5mL straws (100x106 sperm/mL), and placed in a programmable cryopreservation machine. Thawed semen (37°C/ 30s) was analyzed for sperm motility, morphology, and by the hypoosmotic and epifluorescence tests (CFDA/ PI). Natural LDL extracted with 50 percent ASS was as effective as whole egg yolk to preserve canine frozen sperm when using low concentrations. The lyophilized LDL, mainly in the two higher concentrations tested (2 and 3 percent), was unsuitable to maintain the effectiveness of the LDL cryoprotective effect on dog sperm...

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de baixas concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LBD) extraída da gema do ovo de galinha, nas formas natural e liofilizada, na criopreservado do sêmen canino. Diferentes concentrações de sulfato de amônio também foram testadas na extrato da LBD da gema do ovo. A gema foi centrifugada, sendo a LBD isolada usando-se soluto saturada de sulfato de amônio (SSA) nas concentrações de 10, 20, 40, 45 e 50 por cento. A frado rica em LBD foi coletada para caracterizado química. O conteœdo de matéria seca foi menor (P<0,05) na LBD extraída com SSA 50 por cento. A pureza da LBD melhorou medida que se aumentou a concentrado de SSA utilizada. SDS-PAGE mostrou que a SSA 50 por cento produziu uma frado mais pura de LBD oriunda da gema do ovo. Para o congelamento de sêmen, o meio diluidor TRIS teve a gema do ovo a 20 por cento (controle) substituída pela LBD a 1, 2 e 3 por cento (p/v), nas formas natural e liofilizada. O sêmen foi centrifugado (755xg por 7min), diluído em um dos meios diluidores em teste e envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 sptz/mL), sendo congelado em máquina de congelamento programável. O sêmen descongelado (37°C/30s) foi analisado quanto motilidade e morfologia espermática e nos testes hiposm-tico e de epifluorescência (DACF/IP). A LBD natural extraída com SSA 50 por cento foi tão eficiente quanto a gema do ovo na preservado do espermatozoide canino congelado nas baixas concentrações testadas. A LBD liofilizada, principalmente as duas maiores concentrações (2 e 3 por cento), não foi adequada para manter o efeito crioprotetor da LBD sobre o espermatozoide canino...

Echobiometrics kidney and renal artery triplex doppler of canine fetuses / Ecobiometria renal e Doppler Triplex da artéria renal de fetos caninos

The aim of this study was to assess the sogographic parameters and biometry of canine fetal kidneys using the B mode, and to determinate the vascular index of the fetal renal arteries using the Doppler Triplex. Twenty four Shi-tzu and Pug, weighting between 4 and 10kg, aging between 4 and 6 years old were evaluated. The B mode, the fetal renal echobiometry and regularity of the renal surface, echotexture and cortex:medular ratio were evaluated during the 5th, 6th, 7th and 8th weeks of pregnancy. At the same time point of the B mode evaluation, the Doppler Triplex was carried out to assess the sistolic peak velocity (SPV), end diastolic velocity (EDV), vascular resistive (RI) and pulsatility index (PI). B mode revealed no fetal renal abnormalities and echobiometry showed important measurements during fetal development (P<0.0001). The values of the fetal renal arteries index (PSV and EDV) increased during the course of the pregancy (P<0.05) and remained constant for PI and RI (P>0.05). B mode and Doppler Triplex were important tools for the assessment of fetal renal development, using echobiometry and renal arterial index in canie fetuses...

O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio da ultrassonografia convencional modo B, as características sonográficas e a biometria dos rins de fetos caninos, bem como determinar os índices vasculares da artéria renal dos conceptos ao Doppler Triplex. Foram utilizadas 24 fêmeas Shi-tzu e Pugs pesando de quatro a 10 kg e com idade entre quatro e seis anos. Ao modo B, a ecobiometria renal fetal, a regularidade da superfície renal, a ecotextura e a relação córtico-medular foram avaliadas durante a quinta, sexta, sétima e oitava semanas gestacionais. Ao Doppler Triplex, durante o mesmo período em que se realizou o exame convencional, foram determinados o pico de velocidade sistólica (PVS), a velocidade diastólica final (EDV) e o índice de resistência vascular (RI) e de pulsatividade (PI). Ao modo B, não foram detectadas alterações em rins fetais, e à ecobiometria renal dos fetos, foi possível determinar medidas renais importantes, verificando-se aumento das biometrias no decorrer do desenvolvimento fetal (P<0,0001). Ao Doppler Triplex, determinaram-se os índices vasculares da artéria renal fetal, sendo que os valores para PSV e EDV aumentaram no decorrer das semanas gestacionais (P<0,05) e permaneceram constantes para PI e RI (P>0,05). Concluiu-se que o modo B e o Doppler Triplex são ferramentas importantes para a avaliação do desenvolvimento renal fetal, com a utilização da ecobiometria renal e avaliação dos indices vasculares da artéria renal de fetos caninos...

Chorion biopsy in mongrel dogs / Biopsia do cório fetal em cães

With the great development of the gestational studies in all of the species, we noticed the necessity of adaptations of these techniques for prenatal diagnosis in dogs. Based on this, we studied the feasibility of chorion biopsy guided by ultrasound. Our results demonstrated accuracy on the sex determination being 2 males and 12 females, as well as it would be possible to identify chromosome alteration due to the quality of samplings. Sex determination was accomplished with the identification of Y gene chromosomes in PCR technique. After the collection, fragments were prepared for light microscopy studies and revealed fetal chorion tissue, blood colloid and erythrocyte. In the whole material we found hemosiderin impregnations due to the hemolysis and to the residue of blood of the placental marginal hematomes. The submitted female dogs to this technique demonstrated normal puppy births without death.

Com o grande desenvolvimento dos estudos gestacionais em todas as espécies, percebemos a necessidade de adaptarmos técnicas para diagnóstico pré-natal para cães. Assim, buscamos bases nas técnicas já existentes empregadas em humanos, e através destas, conseguimos estabelecer um método para coleta em cães, utilizando PCR para garantirmos a integridade das amostras. O procedimento foi realizado através de punção da cinta placentária com agulha de biopsia guiada por ultra-som. De todas as 14 amostras coletadas, duas apresentaram-se positivas para o cromossomo Y, presente apenas em machos, confirmando assim a viabilidade das amostras demonstrando com isso que através desta técnica podemos coletar material fetal para diagnóstico de alterações gênicas ou cromossômicas presentes nos cães antes mesmo destes virem a termo. A microscopia de material revelou fragmentos de cório fetal, colóide sangüíneo e eritrócitos. Em todo o material encontramos impregnações de hemosiderina devido à hemólise e ao resíduo de sangue dos hematomas marginais placentários. As cadelas submetidas a esta técnica tiveram partos normais sem óbito de nenhum filhote.

Ultra-sonografia bidimensional convencional, de alta resolução e tridimensional no acompanhamento da gestação em cadela / Two-dimensional conventional, high resolution two-dimensional and three-dimensional ultrasonography in the evaluation of pregnant bitch

Gestational period in a bitch, after natural mating with a normal dog, was evaluated by two-dimensional conventional, high-resolution two-dimensional and three-dimensional ultrasonography. High-resolution two-dimensional ultrasonography show better image and provides early diagnosis of pregnancy (15 days) in comparison to conventional one (20 days). Three-dimensional ultrasonography was use to evaluate fetal morphology during late gestation period, however its application is still limited

Hipomielinização em cães Weimaraner: relato de caso / Hypomielination in Weimaraner dogs: case report

Três cães, fêmeas, da raça Weimaraner apresentaram tremores corporais rítmicos generalizados a partir da primeira semana de vida. Outros dois cães, machos, da mesma ninhada não apresentaram alterações. Uma fêmea com quatro semanas de idade foi submetida à eutanásia e necropsiada. Macroscopicamente, observou-se no encéfalo pouca demarcação da substância branca em relação à cinzenta. Histologicamente havia acentuada vacuolização de toda a substância branca subcortical. A mielinização no sistema nervoso periférico estava normal. Os sinais clínicos, a idade de ocorrência e as lesões histológicas são compatíveis com a hipomielinogênese congênita descrita em cães

Three female Weimaraner pups had generalized and rhythmic body tremors since the first week of age. The remaining two male littermates were unaffected. One 4-week-old female was euthanatized and necropsied. On gross examination, poor demarcation between the gray and white matter was observed. Microscopically, there was severe hypomyelination of the brain compatible with congenital hypomyelinogenesis reported in dogs

Time of initial detection of fetal and extra-fetal structures by ultrasonographic examination in Miniature Schnauzer bitches

Serial ultrasonographic examinations were performeddaily on 9 Miniature Schnauzer bitches from the 15th dayof gestation until parturition to determine the time thegestational structures were first detected. The gestationalage was timed from the day of ovulation (day 0), whichwas estimated to occur when the plasma progesteroneconcentration was >4.0ng/ml. The gestational length in 9Miniature Schnauzer bitches was found to be 63.0+/-1.7(range 61-65) days. The initial detection of the fetal andextra-fetal structures were as follows: gestational sac atday 18.0+/-0.9 (17-19); zonary placenta in the uterine wallat day 24.9+/-1.1 (23-26); yolk sac membrane at day 25.0+/-0.9 (24-26); amnionic membrane at day 27.7+/-1.0 (26-29); embryo initial detection at day 22.6+/-0.5 (22-23);heartbeat at day 23.4+/-0.5 (23-24); fetal movement at day32.5+/-0.8 (32-34); stomach at day 31.2+/-1.6 (29-33);urinary bladder at day 32.6+/-1.8 (31-35); skeleton at day34.9+/-1.6 (34-38) and kidney at day 42.2+/-0.7 (41-43).